DNA (ekstraksiyon) izolasyonu

Çilek/Kivi meyvesinde DNA izolasyonu

Rationale: Gerekçe:

In this lab activity, students will investigate DNA and later in the unit see how the understanding of DNA has lead scientists to develop technologies that are having far-reaching effects on biological research, medicine, public policy, and judicial systems.Öğrenciler, insanların sadece çok küçük bir yüzdesinin yaşamış olduğu, hücrelerden DNA ekstraksiyon  prosedürüne katılarak genç bilim adamları rolünü alacaktır. Procedures like this are similar to procedures used to make DNA fingerprints which require purified DNA. Bu gibi prosedürler arındırılmış DNA gerektiren DNA parmak izi elde etmek için kullanılan prosedürler ile benzerdir.

Objectives: By the end of this lesson, students will
Bu dersin sonunda öğrenciler:

·         Çilek DNA’sının neye benzediğini gözlemler ve açıklar.

·         DNA’ nın neye benzediğini önceki izlenimlerini ve gözlemleriyle karşılaştırır.
·         DNA'nın bu laboratuarda görülebileceğini açıklar.
·         Çözünürlüğün DNA’nın görünür kılınması ile ilgisinin olduğunu belirtir.
·         Diğer organizmalardan da DNA  elde edilebilir.
·         DNA izolasyonu önemini açıklar.

 

Malzemeler:

·         Kalın KİLİTLİ buzdolabı torbası

·         Taze / dondurulmuş çilek
·         Sıvı sabun
·         Tuz
·         40 mL etanol
·         Test tüpü ve tüplük
·         Huni ve süzgeç kağıdı
·         Ahşap / cam karıştırma çubuğu
·         Pipet
·         100 mL, 50 mL beher  

Çilek DNA'sı izolasyonu

Purpose : To extract DNA from a strawberry plant Amaç: çilek bitkisinden DNA izole etmek

Overview : In this investigation you will break open strawberry cells, prepare a filtered extract containing strawberry DNA, and separate out molecules of DNA in a test tube.Genel Bakış: Bu araştırmada size, çilek hücrelerini parçalayarak, çilek DNA’sı içeren süzülmüş bir özü hazırlanacak ve bir test tüpünde DNA molekülleri özütten ayıracaktır.

Background : Strawberries are octoploid, meaning that every cell in a strawberry contains eight copies of each of its chromosomes. Açıklama: Çilek, her çilek hücresinin kromozomlarının her biri sekiz kopya içerir, yani octoploid vardır. A strawberry has 7 chromosomes in each set for a grand total of 56 chromosomes. Bir çilek hücresinde 56 kromozom vardır ancak takım sayısında (n) 7 kromozom vardır. As a result, strawberries contain large amounts of DNA. Bunun sonucu olarak, çilekler büyük miktarda DNA içerirler. After this lab, you will never eat a strawberry again without thinking about how much DNA is in it!

Prosedürler:
 

1. Kilitlipoşet içine koyduğunuz çilekleri ezin. Çileklerin ezilmesi, kolay ve olgun çilek hücre duvarlarının parçalanmasına katkıda bulunan enzimleri üretir buda Çilek DNA’sını çıkarmasını kolaylaştırır. These enzymes are known as cellulase and pectinase. Bu enzimler selülaz ve pektinaz olarak bilinir. To extract the DNA, you will first break strawberry cells apart mechanically, by crushing them. DNA izolasyonu için, ezilmesi mekanik olarak çilek hücreleri parçalayacak. Next, you will add detergents to dissolve the cell's plasma membranes.

2. Ezme işleminden sonra içine deterjan ilave edip ezmeye devam edin. Deterjan, hücrenin plazma zarı eritmek için kullanılacak. A filtering step then removes the cell debris.

3.İçine bir miktar tuz ilave edip ezmeye devam edin.

4.Elde edilen özütü beherglasa alın

5.Bir huni içine filtre kağıdı yerleştirin. Oluşan özüt bir filtre kağıdından geçirilerek hücre artıklarından arındırılır ve deney tüpünde biriktirilir.

6.Deney tüpünde The result will be a red colored solution containing DNA and other small dissolved molecules such as sugars and proteins. DNA, şekerler ve proteinler gibi diğer küçük molekülleri çözünmüş olarak içeren kırmızı renkli bir solüsyon oluşur. When cold ethanol is layered on top of this solution, molecules of ethanol repel the DNA molecules, and the DNA clumps together.

7. Bu çözeltiye kendi miktarı kadar soğuk etanol yavaşça ilave edilir,

8.Etanol molekülleri  DNA molekülleri, ve DNA topaklarını çözeltiden alarak üste toplanır. A ropelike clump of many DNA molecules forms that is large enough to see with the unaided eye. Çıplak gözle görülebilecek kadar büyük birçok DNA molekülleri etanol içinde bir yığın oluşturur.

9.Bir bagetle deney tüpü yavaşça karıştırılarak DNA toplanır.

 

Pre-lab Activity : Answer the following pre-lab questions prior to beginning the lab. laboratuvar Aktivitesi:
 

1. To isolate strawberry DNA, you must separate it from other cell materials.            Çilek DNA'sı izole etmek için, diğer hücre maddelerinden ayırmak gerekir. Some of the lab steps you will use are listed in the left column below. Kullanacağınız laboratuvar adımlarının bazıları aşağıdaki sol sütunda listelenmiştir. Match the letter of each lab step with its effects on strawberry cells and enter your answers in the spaces provided. Çilek hücreleri üzerindeki etkileri ile her laboratuvar adımını eşleştirerek boşluklara cevapları girin.

Lab Steps Laboratuvar evreleri

Effects on Strawberry Cells Çilek hücreleri üzerindeki etkileri

a.      Mash the fruitÇilek süzülür b.      Çilek ezilir c.       Filter the strawberry extract Add detergent solutiSüzülmüş özü üzerine soğuk etanol eklenir d.      Deterjan  ve tuz eklenir Layer cold ethanol over filtered extrac

_______ breaks open the cells _______ Hücreler parçalanır _______ dissolves plasma membrane _______ Plazma zarı erir _______clumps DNA _______ DNA içeren sıvı kısım ayrılır _______separates organelles and cell debris, such as fragements of cell walls and membranes, from DNA and small dissolved molecules such as proteins and sugars _______ DNA   proteinler ve şekerler gibi küçük çözünmüş moleküllerden, hücre duvarlarının, organeller ve hücre zarı artıklarından ayrılır.